組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

?

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
四溴熒光素鹽(>85.0%(HPLC))Phospho-FAK (Tyr576/577) Antibody2-溴-5-硝基-甲基吡啶

溶劑紅 48(>98.0%(HPLC)(T))Phospho-FAK (Tyr576/577) AntibodyN-基-哌啶酮

3,4,5,6-四熒光素Phospho-FAK (Tyr397) Antibody三氟

赤蘚紅B(>95.0%(E))Phospho-FAK (Tyr925) AntibodyL-谷氨酸二甲酯鹽酸鹽

結(jié)晶紫九水合物(>95.0%(T))Phospho-FAK (Tyr925) Antibody溴-羥基

四()酸(>98.0%(HPLC)(W))FAK Antibody1-(氨基基)吡咯烷

2-氨基白啶氫溴化物(>98.0%(T))FAK Antibody熒光素

CPC一水合物(=西吡銨一水合物)(>98.0%(HPLC)(T))GPX1 (C8C4) Rabbit mAb2,5-二溴吡

MDEPAP [=化1-甲基-(二氨基偶氮)吡啶鹽](>95.0%(HPLC)(N))ROS1 (D4D6®) Rabbit mAb間三氟

鄰甲酚酞絡(luò)合鈉鹽ROS1 (D4D6®) Rabbit mAb2-溴代異丁酸甲酯

百里酚酞氨羧絡(luò)合劑EEA1 (C45B10) Rabbit mAb四氫-2H-吡喃-酮

鈣黃綠素藍(lán)(>98.0%(T))EEA1 (C45B10) Rabbit mAb氟-三氟

甲基二甲酚藍(lán)(>85.0%(HPLC))5-Lipoxygenase (C49G1) Rabbit mAb溴-2-酚

1,2-雙(2-氨基氧基)烷-N,N,N',N'-四酸(>97.0%(HPLC))Endoglin Antibody (Mouse Specific)溴-甲酸甲酯

反-1,2-環(huán)己二四酸一水合物(>99.0%(T))Phospho-Pyk2 (Tyr402) Antibody氨基-氟甲酸

二亞基三五酸(>98.0%(T))Pyk2 Antibody1-溴-2,4,6-三氟

1,2-二氨基烷-N,N,N',N'-四酸(>98.0%(T))Annexin A1 (D5V2T) XP® Rabbit mAbN-BOC-O-芐基-L-絲氨酸

1,二氨基-2--N,N,N',N'-四酸(>98.0%(T))Annexin A1 (D5V2T) XP® Rabbit mAb8-氨基異喹啉

抗內(nèi)皮細(xì)胞(AECA)ELISA試劑盒X proin (C-rminus)  抗肝病毒X蛋白（C端）300 ul

抗鏈球菌溶血素O(IgG)ELISA試劑盒Profilin 2  前纖維蛋白2100 ul

抗利尿激素/血管加壓素/精氨酸加壓素(ADH/VP/AVP)ELISA試劑盒Proin G  重組蛋白G100 ul

抗酸性酸酶5b(TRACP-5b)ELISA試劑盒Proin A  重組蛋白A20 ul

抗(AsAb)ELISA試劑盒RAM-11  RAM-11300 ul

抗甲狀腺素(T4)(IgG)ELISA試劑盒RAMP-1  受體活性修飾蛋白1100 ul

抗甲狀腺球蛋白(ATGA/TGAB)ELISA試劑盒RACK1  受體激活蛋白激酶C1100 ul

抗甲狀腺過氧化物酶(TPO-Ab)ELISA試劑盒PRMT1  蛋白質(zhì)精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶1100 ul

抗肌內(nèi)膜IgA(EMA IgA)ELISA試劑盒PRCP  脯氨酰羧肽酶20 ul
質(zhì)型多角體病毒PCR檢測試劑盒廠家三磷酸腺苷酶家族蛋白3A抗體Tabersonine中文名：它波寧別名：柳葉甘草堿分子式：C21H24N2O2

載脂蛋白J抗體Aristolactam AIIIa中文名：馬兜鈴內(nèi)酰胺AIIIa別名：分子式：C16H114

載脂蛋白H抗體Ervamycine中文名：11-甲氧基它波寧別名：11-Methoxytabersonine分子式：C22H26N2O3

二磷酸腺苷核糖基轉(zhuǎn)移酶4抗體Seneciphyllinine中文名：別名：12-Acetylseneciphylline分子式：C20H256

AKIRIN2蛋白抗體Corydalmine中文名：紫堇單酚堿別名：分子式：C20H234